实验方法完全参照国标GB 5009.154-2023中的第三法（高效液相色谱-荧光检测法），关键参数给大家标红划重点，咱们做实验时照着调，能少走不少弯路：

1. 流动相配比：A相（辛烷磺酸钠+三乙胺混合液）:B相（星可梯度甲醇）=15:85

2. 流速：1.0mL/min

3. 进样量：20μL

4. 检测器参数：激发波长293nm、发射波长395nm

5. 色谱柱：iMagiLab C18柱（4.6×150mm，5μm）

6. 柱温：30℃

7. 采集时间：37min 

实验结果是检验试剂品质的“硬指标”，咱们分三步看星可梯度甲醇的表现：

第一步：标品出峰——分离度够不够？

先取20μL维生素B6标品进样，得到的色谱图（图1）和数据（表1）很直观：

图 1维生素B6标准图谱（1. 吡哆醛2.吡哆醇3.吡哆胺）

表1 维生素B6标准图谱数据

- 三种形态的出峰时间很清晰：没有出现峰形拖尾、重叠的情况

- 分离度表现亮眼：远高于国标要求的“分离度≥1.5”，这说明星可梯度甲醇作为流动相，能让三种成分“分得明明白白”，不会互相干扰

- 柱效在线：三种成分的柱效都在3988以上，柱效高意味着峰形更尖锐，检测结果更准确

第二步：重复性验证——结果稳不稳？

做实验最怕“一次一个样”，所以咱们对加标样品连续进样6次，计算保留时间（RT）和峰面积（Area）的相对标准偏差（RSD），RSD越小，说明重复性越好：

- 保留时间：全部小于0.5%，6次进样的出峰时间几乎“重合”，没有大起大落 。

- 峰面积：全部小于3%（国标对重复性的要求通常是RSD≤3%） 从重现性色谱图（图2）也能看出来，6次进样的峰形、峰高几乎叠在一起，没有出现异常峰，这说明星可甲醇的批次稳定性够好，不会因为试剂波动导致结果偏差。

图 2 维生素B6的重现性色谱图

表2 维生素B6色谱峰峰面积和保留时间RSD

第三步：标准曲线——线性好不好？

标准曲线的线性关系（r²值）是判断检测方法是否可靠的重要依据，r²越接近1，说明标品浓度和检测响应的关联性越强：

- 吡哆醛标准曲线：y=508.537x，r²＞0.99

- 吡哆醇标准曲线：y=709.091x+42.316，r²＞0.99

- 吡哆胺标准曲线：y=338.134x，r²＞0.99

三条曲线的r²都满足“≥0.99”的要求，说明用星可梯度甲醇做流动相，能精准反映维生素B6的实际浓度，不会出现“浓度测不准”的问题。

标准曲线如下图所示：

图 3盐酸吡哆醛标准曲线

图 4盐酸吡哆醇标准曲线

图 5盐酸吡哆胺标准曲线

通过本次实验可以看出：

·维生素B6各组分的保留时间和峰面积RSD均小于3%；

·标准曲线线性良好，r²均大于0.99；

·各色谱峰之间的分离度均大于1.5，满足定量分析要求。

这些数据不仅证明了实验方法本身的稳定性与重复性，也充分说明：星可梯度甲醇在此实验中表现优异，完全能够满足食品中维生素B6检测的实际需求，是一款值得信赖的“实验室搭档”。